糖含劲骨胶囊鉴别及其氨基四定量测功效盐酸成分葡萄
3、劲骨胶囊鉴别及鉴别碳酸钙
（1）稀盐酸反应法
取胶囊内容物0.2g，功效于10mL试管中，成分作为样品；取对照品碳酸钙0.1g，盐酸于10mL试管中，氨基作为对照品；按样品配方和工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物0.2g，葡萄与样品同法制成阴性样品。糖含
在上述3支试管中分别滴入稀盐酸试液，量测观察反应的劲骨胶囊鉴别及方法实验后观察，样品与对照品即泡沸，功效阴性样品无此反应。成分化学反应式如下:CaCO3+2HCl=CaCl2+CO2↑+H2O。盐酸其泡沸就是氨基反应过程中产生大量CO2气体。
（2）草酸铵试液沉淀法
取胶囊内容物2.5g，葡萄于坩埚中先炭化，糖含转入6000C高温马弗炉中炽灼3～4h，残渣加15mL稀盐酸试液溶解，过滤至50mL具塞试管中，加1滴甲基红试液，用氨试液调至黄色，再加数滴稀盐酸试液使呈酸性，作为样品溶液；取碳酸钙对照品0.6g于50mL具塞试管中，加15mL稀盐酸试液溶解，与样品同法制成对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物2.5g，与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察，样品与对照品析出白色沉淀，放置2h后，试管底部一层白色沉淀更为紧密。
分离该沉淀物，在稀醋酸中不溶，但在稀盐酸中溶解，阴性样品无此反应。化学反应式如下:CaCO3+（NH4）2C2O4=CaC2O4↓（白色）+2NH3+CO2+H2O。
经上述2种简便的化学反应鉴别法，已能证明样品中真实存在碳酸钙。
4、高效液相色谱法鉴别维生素K1
取胶囊内容物2g，于三角瓶中，加0.03mol/L盐酸溶液5mL，600C超声提取10min，加无水乙醇30mL，继续超声20min，取出，放至室温，转移至50mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，作为样品溶液；取维生素K1对照品适量，加无水乙醇溶解，制成2μg/mL，作为对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含维生素K1胶囊内容物2g与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察，样品及对照品色谱峰均达到基线分离，无拖尾，无杂质峰干扰，K1主峰保留时间一致，阴性样品则在此时间内不出峰，如图7所示。
《中国药典二部》对于维生素K1化学纯品，用HPLC正相色谱、紫外、红外进行鉴别。由于K1属于脂溶性维生素，又是微囊化产品，在样品中含量低（10～20μg/g），还有其他成分干扰，因此不能采用药典化学纯品的方法鉴别，也不能用化学反应和薄层色谱法鉴别。借鉴Thompson等的研究和GB5009.158-2016，其中对于婴幼儿和成人营养食品中的维生素K1的测定都采用HPLC方法，柱后还原，荧光检测，这种方法提取纯化步骤较多。本实验进行了优化改进，样品先用稀盐酸超声打破囊壁，再用无水乙醇超声溶解，直接反相色谱分离鉴别。省去了前者蛋白质沉淀，异辛烷提取及后者酶解，正己烷提取等很多分离纯化的繁琐步骤，取得较好的效果。方法的检测限为15ng/g，符合鉴别要求。
5、高效液相色谱法鉴别维生素D3
取胶囊内容物5g，于具塞试管中，加0.02%（mL/mL）氨水溶液10mL和无水乙醇25mL，60℃超声提取10min，取出，放至室温，吸取正己烷10mL于试管中，摇匀，倒入离心管中，3000r/min离心10min，取上层正己烷作为样品溶液；取维生素D3对照品适量，加正己烷溶解，制成0.8μg/mL，作为对照品溶液；按样品配方和工艺制成不含维生素D3胶囊内容物5g，与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察，样品及对照品色谱峰均达到基线分离，无拖尾，无杂质峰干扰，D3主峰保留时间一致，阴性样品则在此时间内不出峰，如图8所示。
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